中国科学院海洋生物技术研究与开发中心团队科学试验研究证明：含30%转基因豆粕饲料喂食罗非鱼“7周以后，…全血指标中白细胞数目、大血小板比率、平均血小板体积和血小板体积分布宽度4项指标显著高于非转基因饲料组,而且差异达到极显著水平”；“结果显示在胃内容物、肠内容物、粪便、心脏、肝脏、胃、肠、卵巢、精巢、脑、鳃丝、脾脏、胆囊、肌肉等不同部位的DNA中都能检测到外源基因的存在,说明转基因大豆中的外源DNA并不能被罗非鱼的消化道完全降解,其DNA片段可能通过消化吸收转移到鱼体的各种组织”；“转基因饲料组罗非鱼的白细胞高于非转基因饲料组可能暗示着转基因饲料有可能导致罗非鱼肌体产生了轻微的炎症。…转基因组的大血小板比率平均值高于非转基因组，可能暗示着转基因饲料组罗非鱼处于某种应激状态，血小板消耗较多。…可以肯定的是，摄食转基因饲料的罗非鱼体内发生了异常的生理生化反应，导致血小板发生了显著的变化”。《中国科学院网站》报道：“鉴定委员会一致认为，该项目首次利用LAMP技术检测转基因大豆饲料并研究了转基因饲料对罗非鱼生理生化指标的影响，研究成果总体达到国际先进水平。”
益海嘉里集团金龙鱼“以危险方法危害社会罪”的铁证
--禁止抗草甘膦转基因作物原料进口、开发、种植、销售理由之110
陈一文（cheniwan@mx.cei.gov.cn）
《新浪网》“陈一文顾问博客”：http://blog.sina.com.cn/cheniwan
《陈一文顾问网站》：http://sea3000.net/cheniwan
（80年代两届全国青联委员）
益海嘉里集团太猖狂，最先跳出来迫害消费者，必须优先重点揭露
笔者注意到个别人士对于越来越多消费者优先重点揭露益海嘉里集团金龙鱼喊冤，对此引用《北京消费者致益海嘉里就金龙鱼转基因大豆油第二封质询函》一段非常清楚的说明：
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dvbs.html
“对方（益海嘉里的代表）又接着说道，经营转基因食品的不只我们一家，中粮、鲁花等等也都在搞，不要总针对我们。小赵答道，因为你们太猖狂，最先跳出来迫害消费者，跳得最高，所以我们不找你们找谁？”
其实，绝大多数消费者非常清楚，对“太猖狂，最先跳出来迫害消费者，跳得最高”的益海嘉里金龙鱼的所有揭露，其他品牌转基因大豆油生产商不仅在看，而且在思考。等到更多消费者更加坚决更加广泛抵制转基因大豆油时，必定有民族品牌食用油生产商站到人民一边，庄严宣布：“从即日起拒绝一切转基因原料！停止生产任何转基因成分食用油！召回已经出厂交货的转基因食用油产品加工为生物质燃料！销毁所有转基因成分豆粕！”
益海嘉里集团金龙鱼“化学浸出”转基因大豆油及其副产品“转基因豆粕”年产1200万吨！
益海嘉里集团金龙鱼“化学浸出”转基因大豆油的副产品是“转基因豆粕”。益海嘉里集团精炼金龙鱼转基因大豆油年产量约300万吨。依照豆油收益率20%计算，益海嘉里集团加工金龙鱼转基因大豆油的副产品“转基因豆粕”年产量约1200万吨，卖给诸多企业加工转基因大豆成分动物饲料与转基因大豆蛋白。
金龙鱼“化学浸出”副产品“转基因豆粕”是转基因大豆蛋白原料来源
《农产品加工》2003年第10期《利用豆粕制取大豆分离蛋白》披露：
http://wuxizazhi.cnki.net/Search/NCPJ200310009.html
“以大豆榨油后形成的副产品———低变性脱脂豆粕为原料,采用新技术分离提纯大豆植物蛋白,是促进大豆产业化发展的重要措施。”
《粮油加工与食品机械》 2005年02期《潘秋琴：脱脂大豆蛋白粉在焙烤食品中的应用研究》披露：
http://wenku.baidu.com/view/6485d301b52acfc789ebc941.html
“大豆蛋白粉的生产工艺：大豆à预榨à浸出à湿粕à低温脱溶à挤压灭酶à粉碎à脱脂蛋白粉。”
“脱脂大豆蛋白粉可以作为一种面粉替代品来制作面包、饼干等焙烤产品。”
金龙鱼“化学浸出”副产品“转基因豆粕”是婴幼儿食品大豆蛋白原料来源
《大豆科技》2009年02期 姜中航《婴儿配方奶粉生产中部分应用大豆分离蛋白的研究》披露：
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-DDTB200902022.htm
【摘要】：通过对人乳和牛乳蛋白质组分的差异比较，利用大豆分离蛋白中的优质氨基酸与乳蛋白混合后的营养互补，提高营养价值…进而提升产品营养，做到婴儿配方奶粉的国产化。
益海嘉里集团金龙鱼“化学浸出”转基因大豆油与脱脂转基因大豆蛋白一起，是国内外不少品牌婴幼儿食品重要成分。
（注：超市中与网络上广泛销售的国内外许多品牌婴幼儿食品的成分注明含“大豆蛋白粉”，但没有明确注明“采用国产非转基因大豆为原料”，均应质疑采用美国孟山都抗草甘膦转基因大豆为原料！）
益海嘉里集团金龙鱼“转基因豆粕”是转基因豆腐的原料
《卫生研究》 1994年03期《佟雅谦、孙灿：利用豆粕制豆腐的研究》披露
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-WSYJ199403015.htm
“60年代以来，随着大豆制油技术的进步和浸出设备的开发利用，豆粕品质有很大改善。以低沸点己烷为溶剂进行油脂浸出，可得到热变性很小的蛋白质，大豆中蛋白质含量约40％，豆粕中蛋白质含量可提高到50％。充分利用豆粕中这种营养价值高的蛋白质，是当今大豆制品研究的重要课题。”
《中国食品科技网》 2009-7-1《提高豆粕豆腐质量的技术》披露：
http://www.tech-food.com/kndata/1016/0032982.htm
“用豆粕生产豆腐是综合利用大豆资源的重要途径之一，但采用普通方法生产的豆粕豆腐较为粗糙、硬。有资料报道，在用低变性豆粕生产豆腐时，添加适量小麦粉、氢氧化钙或钙盐、含氧酸或含氧酸盐，可以使豆腐的质量大为改善。”
国内广泛销售的含大豆成分大量食品检测出转基因成分：
http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-80068-2008117269.htm
“用巢式PCR对部分市售的水产饲料和豆制食品进行检测，90.6%的水产饲料和46.5%的食品能检测出外源基因片段,表明转基因大豆广泛存在于水产饲料和我们的日常食品中”。
《姜海燕：我国大豆主产区黑龙江省大豆及北京市大豆制品的转基因成分检测研究》（中国农业大学作物遗传育种专业硕士研究生论文，导师王建华）披露：
http://d.wanfangdata.com.cn/Thesis_Y774458.aspx
“抽检了北京市场上的鸡蛋豆腐、内酯豆腐、蔬菜豆腐、火锅豆腐等不同类型和不同批次的50份样品，运用所建立的PCR定性检测体系进行了大豆内参照基因Lectin、CaMV35s启动子和CP4-EPSPS目的基因的检测。结果表明，所抽检的50份各类豆腐样品在Lectin引物扩增中出现与预期一致的特异性条带。”
支持转基因食品商业化知名“专家”黄昆仑（农业部农业转基因生物食用安全监督检验测试中心（北京）常务副主任）、罗云波（中国农业大学食品科学与营养工程学院院长）《用巢式和半巢式PCR检测转基因大豆Roundup Ready 及其深加工食品，农业生物技术学报，2003年05期》披露：
http://emuch.net/journal/article.php?id=CJFDTotal-NYSB200305004
“对市场的食品原料和深加工食品进行检测,可以从大豆油、酱油、面酱、大豆磷脂、豆腐、豆浆等食品原料和深加工食品的17个品牌的食品中检测出大豆内标基因。其中,2种食品原料和深加工食品的11个品牌的食品中检测出外源基因CaMV 35S-CTP4基因片段,说明这些食品中含有转基因大豆成分,占被检测食品的76.5%。”
益海嘉里集团金龙鱼“转基因豆粕”许多品牌转基因成分冰棍、冰激凌、肉制品、面制品、乳制品、巧克力制品、营养食品、保健食品、降糖食品、固体饮料等食品大豆蛋白粉原料来源
《脱脂大豆蛋白粉》披露：
http://www.foodqs.cn/product/product_view_168557.html
“脱脂大豆蛋白粉…广泛用于冰制品、肉制品、面制品、乳制品、巧可力制品、营养食品、保健食品、降糖食品、婴幼儿食品、固体饮料等。”
“化学浸出”转基因大豆油的副产品“转基因豆粕”加工的脱脂转基因大豆蛋白粉，除含抗草甘膦转基因大豆含有的所有危害物质，如致敏原、转基因片段与有毒草甘膦残留量外，还含有“化学浸出”使用的溶剂正己烷（神经毒素）残留量。
美国孟山都抗草甘膦转基因大豆成分饲料喂食家畜、家禽的“肉、蛋、奶”也含有活的转基因大豆片段、有毒草甘膦残留等有毒有害物质
美国孟山都公司自己进行的毒理学动物试验证明，每天对老鼠、兔子、猴子、喂食含少量草甘膦的饲料，“结果发现，连续服用10天左右后，实验动物体内草甘膦残留分布水平达到最高值，不再升高。残留量最高的七部分顺序为肾脏（最高）、脾（其次）、脂肪、肝、卵巢、心脏与肌肉。”
哺乳动物喂食转基因成分饲料，发现活的转基因片段进入牛、老鼠、猪、鸡、羊的奶、肉、内脏、血液，进入人类肠胃系统，以至可能“通过胎盘进入未出生的胎儿体内，或是融入成熟生殖细胞中，从而改变子孙后代的遗传特征”
（详见《转基因危害47：研究证实转基因在消化系统中存活并四处游动》
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dumi.html）
国外研究发现喂食转基因成分饲料后，发现活的转基因片段进入牛、老鼠、猪、鸡、羊的奶、肉、内脏、血液等结果，与中国科学院海洋生物技术研究与开发中心团队科学试验研究发现含30%转基因豆粕饲料喂食罗非鱼7周以后“在胃内容物、肠内容物、粪便、心脏、肝脏、胃、肠、卵巢、精巢、脑、鳃丝、脾脏、胆囊、肌肉等不同部位的DNA中都能检测到外源基因的存在,说明转基因大豆中的外源DNA并不能被罗非鱼的消化道完全降解,其DNA片段可能通过消化吸收转移到鱼体的各种组织”的结果一致！（详见后边附录A、B、C）
益海嘉里集团证明他们加工生产“化学浸出”转基因大豆油以及每年生产的约1200万吨副产品“转基因豆粕”是经过卫生部审批“合法转基因食品”的批准文件，更拿不出任何科学试验证据证明他们巨量生产销售的“转基因豆粕”加工的转基因大豆成分饲料与脱脂转基因蛋白粉等一系列转基因成分食品，对人类健康不造成上述类似恶果。
这一系列事实构成益海嘉里集团益海嘉里集团金龙鱼“以危险方法危害社会罪”的铁证！
附录A、陶冉，饲料中转基因成分检测及对水产动物安全性评价的初步研究，《中国科学院研究生院（海洋研究所）》 2008年
http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-80068-2008117269.htm
【摘要】：自转基因作物问世以来,转基因产品的安全性问题一直是人们关注的焦点。本文根据GenBank中登录的转基因大豆完整外源DNA序列设计了几对引物,对转基因大豆进行了巢式PCR检测。结果表明,巢式PCR可以扩增10-10g/μl浓度的DNA溶液,检测灵敏度高达0.01%。该巢式PCR技术具有高度特异性、灵敏度和很好的重复性。
用巢式PCR对部分市售的水产饲料和豆制食品进行检测，90.6%的水产饲料和46.5%的食品能检测出外源基因片段,表明转基因大豆广泛存在于水产饲料和我们的日常食品中,为食品安全分析和管理提供了方法和依据。
环介导的等温扩增技术(LAMP)依赖于能够识别靶序列上6个特异区域的引物和一种具有链置换特性的DNA聚合酶,在等温条件下可高效、快速、高特异地扩增靶序列。
本研究建立了转基因大豆的LAMP扩增技术,针对豆制品以及饲料的转基因LAMP检测技术正在研究和开发中。
利用转基因和非转基因豆粕制作的饲料,喂养吉富罗非鱼,分别于4周、7周取样,对其体重和血液指标进行了检测。
实验显示,投喂转基因饲料7周以后，增重率和血清指标,转基因组与非转基因饲料组相比没有显著差异。全血指标中白细胞数目、大血小板比率、平均血小板体积和血小板体积分布宽度4项指标显著高于非转基因饲料组,而且差异达到极显著水平。
由以上结果可见,转基因大豆与非转基因大豆相比,对罗非鱼的一些生理过程造成了一定的影响,但是并未对其生长造成可见的影响。
分别于投喂1h、4h和8h以后取罗非鱼胃内容物、肠道内容物和粪便,并分别于4周、7周和继续饥饿2周后,取罗非鱼不同组织，提取DNA，用巢式PCR法检测转基因大豆中的外源基因在各种组织中的分布，结果显示在胃内容物、肠内容物、粪便、心脏、肝脏、胃、肠、卵巢、精巢、脑、鳃丝、脾脏、胆囊、肌肉等不同部位的DNA中都能检测到外源基因的存在,说明转基因大豆中的外源DNA并不能被罗非鱼的消化道完全降解,其DNA片段可能通过消化吸收转移到鱼体的各种组织。
在投喂转基因饲料7周以后以及停止投喂饥饿2周以后分离水体中的微生物,提取其DNA,进行转基因检测。结果显示在所分离纯化的各种微生物中都没有检测到转基因大豆中外源基因35S-EPSPS的存在。
【关键词】：转基因大豆 检测 巢式PCR 罗非鱼 安全性评价
【学位授予单位】：中国科学院研究生院（海洋研究所）
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：S963
【目录】：
中文摘要5-6
Abstract6-8 引言8-9
1 前言9-27
1.1 全球转基因作物的发展现状9-10
1.2 转基因作物的安全性问题10-14
1.3 转基因检测技术的研究进展14-20
1.4 巢式PCR(nested PCR)和环介导的等温扩增技术(LAMP)简介20-22
1.5 本研究的必要性、主要内容和意义22-27
2 转基因作物及水产饲料的检测27-39
2.1 材料和方法27-33
2.2 结果和分析33-39
3 含有转基因成分的饲料对水产动物安全性评价的初步研究39-51
3.1 材料和方法39-40
3.2 结果和分析40-51
4 结论和讨论51-59
4.1 样品DNA 提取方法51
4.2 转基因作物及其产品的PCR 检测51-53
4.3 转基因大豆的 LAMP 检测53-54
4.4 转基因饲料的检测54
4.5 转基因饲料对罗非鱼生长和生理的影响54-56
4.6 转基因大豆外源基因在罗非鱼体内各组织器官的残留
以及在养殖水体微生物的漂移56-59
5 实验总结59-60
5.1 创造性成果59
5.2 存在的问题与建议59-60
参考文献60-68
发表论文目录68-69
致谢69
附录B、刘梅、陶冉等，进口转基因大豆（Roundup Ready）对吉富罗非鱼生长和生理的影响，粮食与饲料工业，2009(2), pp43-45
http://www.doc88.com/p-74762740168.html
刘梅1, 陶冉1、2, 王雷1, 王宝杰1, 蒋克勇1
( 1. 中国科学院海洋研究所, 山东青岛 266071;
2. 荣成检验检疫局, 山东荣成264300)
摘要: 利用进口转基因和国产非转基因豆粕制作饲料，喂养吉富罗非鱼，分别于饲喂4周、7周以后称量体重，取其血液，检测其血液常规生理生化指标，评价转基因豆粕对罗非鱼生长和生理的影响。结果显示投喂转基因饲料组与非转基因饲料组相比，罗非鱼的增重率没有显著差异(P > 0. 05)。投喂转基因饲料4周以后， 罗非鱼的血液生理指标没有显著差异。7周以后，转基因组与非转基因饲料组相比，各项血清指标没有显著差异。全血指标中白细胞数目(P = 0. 001)、大血小板比率(P =0. 002)、平均血小板体积(P = 0. 000)和血小板体积分布宽度(P = 0. 001) 4项指标显著高于非转基因饲料组, 而且差异达到极显著水平(P < 0. 01) 。由以上结果可见, 进口转基因大豆与国产非转基因大豆相比, 对罗非鱼的一些生理过程造成了一定的影响, 但是并未对其生长造成可见的影响。
转基因技术给饲料工业带来了很多高产优质和特殊用途的作物品种, 随着转基因作物的迅速发展与应用, 现已有大量的转基因作物作为饲料原料为动物所食用[ 2] , 由此引发了人们对转基因作物对食物链安全乃至对环境、生态系统安
全的忧虑[ 3] 。
转基因作物及其加工副产品进入食物链, 对饲养动物的安全性影响如何, 进而可能对人类健康造成何种影响, 这也是广大消费者迫切关注的问题。
本研究利用尼罗罗非鱼( Oreochrom is nilo ticus ) 吉富品系作为养殖动物, 制作含有30%豆粕的罗非鱼饲料, 饲喂罗非鱼, 评价转基因豆粕对罗非鱼生长和生理的影响, 有助于丰富转基因大豆安全性评价方面的工作。
2 结果
2. 1 转基因豆粕对罗非鱼生长的影响
由表1可见, 转基因饲料组与非转基因饲料组相比, 罗非鱼的增重率差异不显著( P > 0. 05)。
2. 2 转基因豆粕对罗非鱼血液生理生化指标的影响
由表2可知, 4周以后, 两组罗非鱼的全血指标和血清指标之间差异不显著(P > 0. 05)。7 周以后, 全血指标中白细胞数目、大血小板比率、平均血小板体积和血小板体积分布宽度4项指标显著高于非转基因饲料组, 而且差异极显著水平(P < 0. 01) 。血清指标与非转基因饲料组相比差异不显著(P > 0. 05) 。
3 讨论
3. 1 转基因饲料对罗非鱼生长和生理的影响
本研究中分别利用含有转基因豆粕和非转基因豆粕的饲料喂养吉富罗非鱼， 在投喂4周以后，摄食转基因饲料和非转基因饲料的罗非鱼生长与生理状况没有显著的差别。但是在投喂饲料7周以后摄食转基因饲料的罗非鱼白细胞计数、大血小板比率、平均血小板体积、血小板体积分布宽度4项血液指标明显高于非转基因饲料组, 其中大血小板比率、平均血小板体积、血小板体积分布宽度3项指标的差异达到极显著水平。
在各项血液指标中，白细胞计数是血液常规检测指标，对诊断因细菌感染造成的感染症或白血病等多种疾病很有帮助。转基因饲料组罗非鱼的白细胞高于非转基因饲料组可能暗示着转基因饲料有可能导致罗非鱼肌体产生了轻微的炎症。
血小板是具有酶和多项生理活性的血细胞，尤其是在止血和凝血过程中发挥重要作用，而大血小板是指体积大于一定数值的血小板，大血小板比率是指大血小板占总血小板的比例，在多种生理或病理过程中都可出现比例的升高。
血小板体积增大说明血小板因消耗多而应激性增生,新生的血小板体积一般比较大。大血小板的功能强，更年轻，止血功能更强。转基因组的大血小板比率平均值高于非转基因组，可能暗示着转基因饲料组罗非鱼处于某种应激状态，血小板消耗较多。
平均血小板体积(MPV )是血小板活化的一个重要指标。M PV 升高，血小板体积增大，活性增强。与大血小板比率存在一致性。血小板体积分布宽度是以血小板体积变异系数来表示，是一个反映血小板体积大小的异质性参数。
血小板分布宽度若在正常范围内，提示血小板比容均一；血小板分布宽度增多，提示血小板体积大小不均，个体间相差悬殊；血小板分布宽度减少，提示血小板减少。
骨髓纤维化、原发性血小板减少性紫癜、血栓性疾病及血栓前状态、脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、镰刀细胞性贫血等都有可能引起大血小板比率、平均血小板体积和血小板分布宽度的升高。
虽然引起转基因饲料组罗非鱼血小板指标升高的具体原因尚不清楚，但是可以肯定的是，摄食转基因饲料的罗非鱼体内发生了异常的生理生化反应，导致血小板发生了显著的变化。
在本研究中，摄食转基因饲料的罗非鱼血小板指标明显高于非转基因对照组，由此可以推断转基因饲料虽然不能对罗非鱼的生长造成可见的影响，但是却有可能引起肌体产生了细微的生理变化，在白细胞和血小板上可表现出来。
附录C、转基因作物检测及安全性评价方法研究取得进展
转载自《中国科学院网站》（发布时间：2008-02-04）：
http://www.cas.cn/ky/kyjz/200802/t20080204_1028997.shtml
日前，由海洋生物技术研究与开发中心刘梅、王雷等承担的青岛市科技发展项目“转基因作物检测及安全性评价方法的研究”通过验收和成果鉴定。
该项研究建立了针对转基因大豆及其深加工产品的巢式PCR检测技术，利用该技术对32种水产饲料和43种食品进行了转基因检测；同时建立了针对转基因大豆的LAMP检测技术，简便实用易于推广。
该项目首次研究了转基因大豆对罗非鱼生理生化指标的影响、转基因大豆中外源基因在罗非鱼各组织中的分布以及外源基因在养殖水体微生物间的漂流。
鉴定委员会一致认为，该项目首次利用LAMP技术检测转基因大豆饲料并研究了转基因饲料对罗非鱼生理生化指标的影响，研究成果总体达到国际先进水平。
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农业部必须公布孟山都转基因大豆伪造安全文件重新接受审查
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